DsRFP (Stærkt RBS) Responsgen

Beskrivelse

Dette responsgen er et rødt fluorescerende protein (RFP: Red Fluorescent Protein).  Proteinet stammer fra korallen Discosoma striata, men forskere har efterfølgende blevet muteret protein således mere egnet til brug i forskning. Foran den kodende sekvens for DsRFP genet findes et stærkt ribosomal binding site (RBS), dermed producerer celler med dette responsgen mange kopier af DsRFP, som medfører en kraftig rød farve.

Her ses en Niveau 1 biosensor som er lavet med DsRFP (Stærkt RBS) responsgenet.

Detektion

DsRFP genet er egentligt et fluorescerende protein, dvs. at det skal exciteres for at udsende lys. Proteinet exciteres bedst af lys med en bølgelængde på 584 nm, derved udsender (emittere) proteinet lys med en bølgelængde på 607 nm. Det har dog vist sig at hvis DsRFP proteinet udtrykkes i tilstrækkelig store mængder kan det ses med det blotte øje. En Niveau 1 biosensor med dette responsgen vil udtrykke DsRFP i store mængder. Dermed vil bakterierne være synligt røde efter ca. 12 timers inkúbering på en agarplade med LB medie. Lader du dem stå i 30 – 40 timer bliver farven tydeligere.

 

Inspiration til yderligere forsøg med din Biosensor:

-         Sammenlign den røde farve med en Niveau 1 biosensor med responsgenet DsRFP (svagt RBS). Hvilken farve er kraftigst? Hvorfor er der forskel?

-         Hvis du har mulighed for at måle absorbans kan du måle abosorbansen ved excitationstoppen på 584 nm.