RFP med svagt RBS Responsgen

Beskrivelse

Dette responsgen er et rødt fluorescerende protein (RFP: Red Fluorescent Protein).  Proteinet stammer fra korallen Discosoma striata, men forskere har efterfølgende blevet muteret protein således mere egnet til brug i forskning. Foran den kodende sekvens for DsRFP genet findes et svagt ribosomal binding site (RBS), dermed producerer celler med dette responsgen få kopier af DsRFP, som medfører en svag rød farve.

Billedreference

Detektion

DsRFP genet er egentligt et fluorescerende protein, dvs. at det skal exciteres for at udsende lys. Proteinet exciteres bedst af lys med en bølgelængde på 584 nm, derved udsender (emittere) proteinet lys med en bølgelængde på 607 nm. Det har dog vist sig at hvis DsRFP proteinet udtrykkes i tilstrækkelig store mængder kan det ses med det blotte øje. På grund af det svage RBS vil en Niveau 1 biosensor med dette responsgen udtrykke små mængder DsRFP. Efter ca. 12 timers inkubering kan man svagt se en lille rød plet i midten af kolonierne. Lader du dem stå i 30 – 40 timer bliver farven lidt tydeligere. For rigtigt at kunne se den røde farve skal bakterierne udsættes for UV-lys – HUSK i den forbindelse at bruge UV-beskyttelsesbriller.

 

Inspiration til yderligere forsøg med din Biosensor:

-         Sammenlign den røde farve med en Niveau 1 biosensor med responsgenet DsRFP (stærkt RBS). Hvilken farve er kraftigst? Hvorfor er der forskel?

-         Hvis du har mulighed for at måle absorbans kan du måle abosorbansen ved excitationstoppen på 584 nm.